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ELISA 檢測試劑盒的方法
點擊次數:831 更新時間:2016-12-08

ELISA 檢測試劑盒的方法

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知VD濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將VD和標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經過溫育和洗滌,去除未結合的酶結合物,然后加入底物A、B,和酶結合物同時作用。產生顏色。顏色的深淺和樣品中VD的濃度呈比例關系?!               ∽詡洳牧险麴s水。加樣器:5ul、0ul、50ul、00ul、200ul、500ul、000ul。振蕩器及磁力攪拌器等。安全性避免直接接觸終止液和底物A、B。一旦接觸到這些液體,請盡快用水沖洗。實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。操作注意事項試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。人ELISA 檢測試劑盒樣品收集、處理及保存方法血清-----操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原和內毒素的試管。收集血液后,000×g離心0分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。血漿-----EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。000×g離心30分鐘去除顆粒。細胞上清液---000×g離心0分鐘去除顆粒和聚合物。保存------如果樣品不立即使用,應將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。試劑的準備標準品:標準品的系列稀釋應在實驗時準備,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋。操作步驟使用前,將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫,以免加樣時加入大量的氣泡,產生加樣上的誤差。根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定,能使用復孔的盡量做復孔。加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的標記的抗體。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,37℃溫育小時。甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。甩去孔內液體,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,洗滌次數增加一次。每孔加入底物A、B各50ul,輕輕振蕩混勻,37℃溫育0分鐘。避免光照。取出酶標板,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應立即測定結果。在450nm波長處測定各孔的OD值。人ELISA 檢測試劑盒局限6號標準品以上的結果為非線性的,根據此標準曲線無法得到的結果。試劑盒性能. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.990。2. 特異性:不與其它細胞因子反應。3. 重復性:板內、板間變異系數均小于0%。結 果 判 斷 與 分 析、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值2、以吸光度OD值為縱坐標(Y),相應的VD標準品濃度為橫坐標(X),做得相應的曲線,樣品的VD含量可根據其OD值由標準曲線換算出相應的濃度。3、檢測值范圍:0-400ng/ml4、敏感度: .0 ng/ml人ELISA 檢測試劑盒DA332-0.2ml CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A) 細胞表面趨化因子受體2A抗體 0.2mlDA333-0.2ml CCR-2B(C-C Chemokine receptor 2B) 細胞表面趨化因子受體2B抗體 0.2mlDA334-0.ml CCR-3(CC chemokine receptor 3) 細胞表面趨化因子受體3抗體 0.mlDAP458-0.ml phospho-c-Raf(Ser338/Tyr340) ?磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.mlDAP459-0.ml phospho-c-Raf (Ser289) ?磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.mlDAP460-0.ml phospho-c-Raf (Ser259) ?磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.mlDA334-0.2ml CCR-3(CC chemokine receptor 3) 細胞表面趨化因子受體3抗體 0.2mlDA335-0.2ml CCR-4(C-C chemokine receptor 4) 細胞表面趨化因子受體4抗體 0.2mlDA336-0.2ml CCR-5(C-C chemokine receptor 5) 細胞表面趨化因子受體5抗體 0.2mlDA337-0.2ml CCR-6/CD96(C-C chemokine receptor type 6) 細

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