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RNA酶保護試驗方法分析
點擊次數(shù):708 更新時間:2017-04-01

PⅢNP Elisa試劑盒RNA酶保護法是近十年發(fā)展起來的一種全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是將標記的特異RNA探針(32P或)與待測的RNA樣品液相雜交,標記的特異RNA探針按堿基互補的原則與目的基因特異性結(jié)合,形成雙鏈RNA;未結(jié)合的單鏈RNA經(jīng)RNA酶A或RNA酶T消化形成寡核糖核酸,而待測目的基因與特異RNA探針結(jié)合后形成雙鏈RNA,免受RNA酶的消化,故該方法命名為RNA酶保護實驗。

與Northern blot和RT-PCR比較,RPA有以下幾個優(yōu)點:

. 檢測靈敏度比Northern雜交高。由于Northern雜交步驟中轉(zhuǎn)膜和洗膜都將造成樣品和探針的損失,使靈敏度下降,而RPA將所有雜交體系進行電泳,故損失小,PⅢNP Elisa試劑盒提高了靈敏度。

2. 由于PCR擴增過程中效率不均一和反應“平臺”問題,基于PCR產(chǎn)物量進行分析所得數(shù)據(jù)的可靠性將下降,而RPA沒有擴增過程,因此,分析的數(shù)據(jù)真實性較高。

3.由于與反義RNA探針雜交的樣品RNA僅為該RNA分子的部分片段,因此,部分降解的RNA樣品仍可進行分析。

4.步驟較少,耗時短。與Northern雜交相比,省去了轉(zhuǎn)膜和洗膜的過程。

5. RNA-RNA雜交體穩(wěn)定性高,無探針自身復性問題,無須封閉。

6. 一個雜交體系中可同時進行多個探針雜交,無競爭性問題。

7. PⅢNP Elisa試劑盒檢測分子長度可以任意設置,靈活性大。RPA的缺點是需要同位素標記探針。

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